樣品:從玉林、貴港、北海三市23個(gè)中型規(guī)模場共采集723份血清樣品，包括公豬、能繁母豬、后備母豬。

     試劑:CSFV抗體檢測試劑盒、PＲVgpI(gE)抗體檢測試劑盒購自美國IDEXX公司;PＲＲSVELISA檢測試劑盒、PCV－2ELISA檢測試劑盒，購自北京金諾百特科技有限公司。

     CSFV的檢測步驟:①每個(gè)檢測孔和對(duì)照孔中加入50μL樣品稀釋液;②50μL的陽性對(duì)照和陰性對(duì)照分別加入對(duì)照孔中;③剩余檢測孔中加入50μL待檢樣品;④覆蓋封板膜后室溫孵育2h;⑥用300μL洗滌液洗板3次，最后一次拍干洗液;⑦每個(gè)反應(yīng)孔加入100μL辣根過氧化物酶標(biāo)記(HＲPO)的抗CS-FV的酶標(biāo)抗體，覆蓋封板膜室溫孵育30min;⑧重復(fù)步驟⑥;⑨每個(gè)反應(yīng)孔加入100μL底物溶液，避光反應(yīng)10min后，每孔加入100μL終止液。

     PＲＲSV的檢測步驟(PCV－2的檢測步驟相同，僅加入酶結(jié)合抗體不同):①將抗原反應(yīng)板取出，分別加入100μL稀釋后的陽性對(duì)照、陰性對(duì)照和樣品，覆蓋封板膜后室溫孵育30min;②棄去①中液體，并加入300μL洗滌液，洗滌3次，最后一次拍干洗液;③每個(gè)反應(yīng)孔加入酶結(jié)合抗體100μL，室溫孵育30min;④重復(fù)步驟②;⑤每個(gè)反應(yīng)孔加入TMB底物溶液100μL，室溫孵育15min;⑥每個(gè)反應(yīng)孔加入50μL終止液。

     PＲV的檢測步驟:①將抗原反應(yīng)板取出，分別加入100μL稀釋后的陽性對(duì)照、陰性對(duì)照和樣品，覆蓋封板膜后室溫孵育60min;②棄去①中液體，并加入300μL洗滌液，洗滌3次，最后一次拍干洗液;③每個(gè)反應(yīng)孔加入100μL辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗PＲVgpI的酶標(biāo)抗體，覆蓋封板膜室溫孵育20min;④重復(fù)步驟②;⑤每個(gè)反應(yīng)孔加入TMB底物溶液100μL，室溫孵育15min;⑥每個(gè)反應(yīng)孔加入50μL終止液。

     結(jié)果判定:CSFV、PＲＲSV、PCV－2試驗(yàn)結(jié)果均置酶標(biāo)儀450nm波長處讀數(shù)，PＲV試驗(yàn)結(jié)果置酶標(biāo)儀650nm波長處讀數(shù)。其中，CSFV抗體判定標(biāo)準(zhǔn):阻斷率(%)=(1－樣本A450/陰性對(duì)照平均值)×100%，阻斷率≥40%，判為陽性(有抗體存在)，阻斷率≤30%，判為陰性(無抗體存在);PＲＲSV和PCV－2抗體判定標(biāo)準(zhǔn):S/P=［(樣品值－陰性值)/(陽性值－陰性值)］，S/P值≥0.4，判為陽性，S/P值＜0.3，判為陰性，但此結(jié)果不能區(qū)分感染陽性或免疫陽性;PＲV抗體判定標(biāo)準(zhǔn):S/N=樣本A650/陰性對(duì)照平均值，S/N值≤0.60，判為PＲVgpI抗體陽性，S/N值＞0.70，判為PＲVgpI抗體陰性。由于所調(diào)查地區(qū)規(guī)模場均使用gpI缺失PＲV疫苗，因此通過此試劑盒檢測，一旦檢出PＲVgpI抗體陽性，則可判定為已受野毒感染。

     檢測結(jié)果顯示，CSFV抗體檢測陽性數(shù)為655份，陽性率為90.59%(655/723)。PＲV抗體檢測陽性數(shù)為51份，陽性率為7.05%(51/723)，有8個(gè)規(guī)模場檢測到PＲV抗體陽性。有6個(gè)規(guī)模場種豬不免疫PＲＲS疫苗，PＲＲSV抗體檢測陽性數(shù)為70份，陽性率為100%(70/70);17個(gè)已免疫疫苗的規(guī)模場，PＲＲSV抗體檢測陽性數(shù)為652份，陽性率為99.85%(652/653)。有13個(gè)規(guī)模場種豬不免疫PCV－2疫苗，PCV－2抗體檢測陽性數(shù)為169份，陽性率為93.89%(169/180);10個(gè)已免疫疫苗的規(guī)模場，PCV－2抗體檢測陽性數(shù)為508份，陽性率為93.55%(508/543)。

     23個(gè)規(guī)模場種豬群免疫抗體陽性率達(dá)到90.59%。許多研究表明，當(dāng)豬群免疫抗體合格率平均達(dá)到85%以上時(shí)，種群感染或發(fā)生CSF的幾率較小。本次調(diào)查結(jié)果顯示，所抽查檢測豬群整體免疫情況良好，種群獲得較好的保護(hù)力。CSF是廣西地區(qū)流行的主要豬群疫病之一，但流行態(tài)勢已從過去急性發(fā)生，大規(guī)模死亡轉(zhuǎn)變成病毒在在豬群潛伏感染，溫和散發(fā)流行。因此，當(dāng)前規(guī)模場在開展種豬CSF防控工作時(shí)，在疫苗有效含量，疫苗質(zhì)量得到保證的前提下，應(yīng)將工作重心轉(zhuǎn)移到免疫程序和生物安全措施上，根據(jù)本場特點(diǎn)，掌握母源抗體消長規(guī)律，制定科學(xué)合理的免疫程序。對(duì)長期免疫抗體低下，經(jīng)多次檢測免疫抗體仍不達(dá)標(biāo)準(zhǔn)，或病原檢測呈陽性的種豬群，應(yīng)及時(shí)淘汰。

     6個(gè)規(guī)模場不免疫PＲＲS疫苗，其場內(nèi)種豬群所抽檢70份樣PＲＲSV抗體陽性率達(dá)到100%(70/70)。據(jù)此看出，未免疫種豬群體可能已全部隱性感染PＲＲSV，這十分容易引起該地區(qū)規(guī)模場豬群PＲＲSV的傳播與流行。建議規(guī)模場養(yǎng)殖者應(yīng)高度重視種豬群體的PＲＲS的防控工作，有條件的主場可以檢測場內(nèi)存在的流行毒株，選擇合適的毒株疫苗配合種群凈化工作對(duì)PＲＲS進(jìn)行綜合防控。

     本次調(diào)查結(jié)果顯示，有13個(gè)規(guī)模場種豬不免疫PCV－2疫苗，占56.52%(13/23)，種群抗體陽性率達(dá)到93.89%。部分省份和地區(qū)PCV－2血清抗體陽性率達(dá)到100%，筆者對(duì)廣西10個(gè)地級(jí)市的發(fā)病豬群使用PCＲ方法進(jìn)行病原學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)，全區(qū)PCV－2檢出率達(dá)到67.15%，已成為廣西地區(qū)豬群普遍感染病原。PCV－2感染可以一定程度上抑制機(jī)體對(duì)豬瘟疫苗免疫的應(yīng)答，成為免疫失敗和誘使豬瘟發(fā)生的原因。規(guī)模場應(yīng)當(dāng)制定更嚴(yán)格的調(diào)運(yùn)措施，切實(shí)做好入場檢疫工作，特別是進(jìn)一步制定合理的PCV－2免疫程序，認(rèn)真做好種群疫病凈化工作，降低豬群隱性感染或繼發(fā)感染PCV－2的風(fēng)險(xiǎn)。

     共有8個(gè)規(guī)模場檢測出PＲV抗體陽性，占檢測場數(shù)的34.78%(8/23)。結(jié)果顯示，所調(diào)查規(guī)模場約1/3存在種豬PＲV抗體陽性。本次調(diào)查結(jié)果gE感染抗體陽性率7.05%，與山西8地市部分規(guī)模場gE感染抗體平均陽性率2.98%相比偏高，與廣東省36個(gè)中小規(guī)模豬場種豬gE感染抗體平均陽性率11.67%～23.50%，福建省106個(gè)規(guī)模場種豬gE感染抗體平均陽性率12.3%～24.2%相比則偏低，且差異性極顯著(P＜0.001)。這表明廣西地區(qū)種豬的PＲV野毒感染能得到夠較為有效的控制。通過現(xiàn)場調(diào)查發(fā)現(xiàn)，規(guī)模場均高度重視PＲ的防控，全群均按程序進(jìn)行免疫，因此PＲ的防控收到較為良好的效果，但仍有g(shù)E感染抗體陽性，原因可能一是種豬群已隱性感染PＲＲSV、PCV－2等免疫抑制性疫病病原，增加了感染野毒的風(fēng)險(xiǎn);二是由于忽視前期引種工作，入場檢疫不嚴(yán)格，引發(fā)PＲV在場內(nèi)垂直或水平傳播，但由于疫苗的廣泛應(yīng)用，使感染強(qiáng)度一直維持在較低水平;三是沒有做好PＲ凈化工作，導(dǎo)致陽性種群持續(xù)存在，成為隱性感染源。因此，針對(duì)近年P(guān)ＲV侵襲力持續(xù)漸增的情況，建議對(duì)于出現(xiàn)種群gE感染抗體陽性的規(guī)模場，應(yīng)當(dāng)對(duì)種豬進(jìn)行血清學(xué)或病原學(xué)監(jiān)測，對(duì)檢測陽性豬堅(jiān)決淘汰，此后按季度進(jìn)行篩查，直到全群陰性，并且配合建立良好的飼養(yǎng)管理和生物安全措施，達(dá)到全場PＲ凈化。

(廣西動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘海霞，鄭敏，溫麗霞，楊榮，陳芳芳，鄭列豐，梁晟，鐘華訓(xùn))